層析冷柜是專為生化層析實驗而研制的特殊用途低溫柜,同時也可進行其他需要低溫環(huán)境的實驗;不做實驗時則可用于物品冷藏保存。在推出的早期,主要關注于功能,對其他功能則被忽略了。隨著各領域?qū)游龉竦男枨笤黾樱涔δ芤灿蓡我还δ芟蚨喙δ苓M行發(fā)展轉(zhuǎn)變。由此給選型帶來一定難度。
一、凝膠過濾層析
凝膠過濾分子篩層析是利用有一定孔徑范圍的多孔凝膠作為固定相,對混合物中各組分按分子大小進行分離的技術。具有分子篩作用的物質(zhì)很多,如浮石、瓊脂、瓊脂糖、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、葡聚糖凝膠等。
二、離子交換層析
離子交換法是以具有離子交換性能的物質(zhì)作固定相,利用它與流動相中的離子能進行可逆的交換性質(zhì)來分離離子型化合物的一種方法。
1、緩沖液與pH:選擇適當?shù)木彌_體系,起始濃度要盡可能低些(0.01-0.05M)緩沖液PH值:陽離子低于pI一個pH單位以上陰離子通常高于pI一個pH單位以上。蛋白質(zhì)在不同pH下保留行為差別較大,所以許對緩沖體系和操作pH進行摸索,以得到較佳條件。
2、離子強度;洗脫時多采用離子濃度梯度,常加NaCl,KCl,LiCl等.在不同鹽濃度(離子強度)及其不同變化率(梯度)條件下保留行為不同,需對該條件進行摸索。一般的,隨離子強度增加,蛋白質(zhì)保留值減小。
三、疏水層析
原理:基于生物分子表面疏水性不同而達到分離的技術。疏水作用來自于分子的水化結構,高濃度鹽溶液破壞生物分子的水化結構,使蛋白質(zhì)內(nèi)部的疏水基團暴露于分子外表面,從而可與疏水介質(zhì)結合。
蛋白質(zhì)以高濃度鹽溶液結合與柱上,以低濃度鹽溶液洗脫。生物分子表面大都有或強或弱的疏水區(qū)域,在不同環(huán)境下,與各種疏水介質(zhì)產(chǎn)生不同強弱的結合。高離子強度可加強疏水性。跟離子交換相反,高鹽吸附,低鹽洗脫;洗脫樣品又可直接或稍加稀釋后加上其他柱,作為連接步驟的橋梁,取代鹽析沉淀技術。配體種類繁多,很難預測哪一種、哪一個條件適合,可用試盒選擇介質(zhì)
四、親和層析
親和是利用待分離物質(zhì)和它的特異性配體間具有特異的親和力,從而達到分離目的的一類特殊層析技術。親和層析純化過程簡單、迅速,且分離效率高。